【預(yù)期用途】

僅供科研使用，用于檢測血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液等相關(guān)樣本中甲型流感病毒抗體（Flu A-Ab）的表達。

【檢測原理】

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中甲型流感病毒抗體（Flu A-Ab）表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中甲型流感病毒抗體（Flu A-Ab）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中甲型流感病毒抗體（Flu A-Ab）的存在與否。

【操作步驟】

1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）。

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

8. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10-20分鐘。

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

【注意事項】

1. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

2. 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

3. 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。  

4. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm。

5. 顯色時間供參考，因用戶實驗室條件差異，最佳顯色時間會有所不同。

6. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

7. 本試劑不同批號組分不得混用。

8. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應(yīng)避免用力過大導致液體濺出。