一、唾液樣本

采集規(guī)范

空腹采集，避免進(jìn)食后30分鐘內(nèi)取樣（唾液淀粉酶含量升高干擾檢測）

使用無菌唾液采集管，避免口腔黏膜細(xì)胞混入

處理流程

樣本收集后立即于-70℃速凍1小時，冰上融化后10000rpm離心10分鐘取上清短期保存（<7天）可置于4℃，長期需分裝后存于-80℃（保存期≤2個月）

二、尿液樣本

采集要求

無菌管收集中段尿，避免微生物污染

樣本體積需≥50μL（適配微量ELISA試劑盒）

預(yù)處理要點(diǎn)

2000-3000rpm離心20分鐘，取上清檢測；若沉淀復(fù)現(xiàn)需二次離心

高濃度尿素樣本建議1:5 PBS稀釋后檢測（降低基質(zhì)效應(yīng)）

三、糞便樣本

均質(zhì)化處理

取干燥糞便塊（>50mg）與PBS按1:9（w/v）混合，冰浴超聲破碎后5000×g離心10分鐘

建議添加0.05M EDTA緩沖液（抑制金屬蛋白酶活性）

儲存規(guī)范

分裝后-80℃保存≤2個月，避免反復(fù)凍融（凍融次數(shù)≤3次）

四、腦脊液樣本

采集禁忌

需專業(yè)腰椎穿刺獲取，避免血液污染（紅細(xì)胞裂解釋放血紅蛋白干擾檢測）

采集后30分鐘內(nèi)完成離心處理

離心參數(shù)

2000-3000rpm離心20分鐘，取透明上清液

高脂樣本需超速離心（10000×g，15分鐘）去除脂蛋白干擾

五、胸腹水樣本

細(xì)胞碎片清除

無菌管收集后立即離心（2000-3000rpm，20分鐘）

渾濁樣本可添加1% Triton X-100裂解細(xì)胞（驗(yàn)證對靶標(biāo)無影響）

儲存條件

分裝后-80℃保存≤3個月，復(fù)溶時37℃水浴緩慢解凍

六、組織勻漿樣本

勻漿制備規(guī)范

新鮮組織剪碎后按1:9（w/v）加入預(yù)冷PBS，冰浴勻漿至無可見顆粒

建議添加蛋白酶抑制劑（如1mM PMSF）防止靶標(biāo)降解

離心參數(shù)

5000×g離心5分鐘取上清，脂質(zhì)層用注射器針頭小心吸除

七、細(xì)胞裂解液樣本

裂解關(guān)鍵步驟

貼壁細(xì)胞用預(yù)冷PBS清洗3次后加入RIPA裂解液（含1%蛋白酶抑制劑）

裂解后10000-14000×g離心5分鐘，避免使用含SDS裂解液（干擾包被抗體）

八、精液/陰道分泌物樣本

液化處理

精液樣本需37℃孵育30分鐘液化，4000rpm離心10分鐘取精漿

陰道分泌物需2000-3000rpm離心20分鐘去除上皮細(xì)胞

檢測優(yōu)化

高黏稠樣本建議1:3 PBS稀釋（降低背景信號）

驗(yàn)證基質(zhì)效應(yīng)：比較稀釋樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率偏差（偏差>15%需重新處理）

科研場景關(guān)鍵質(zhì)控點(diǎn)

1.抗干擾策略

高脂血癥/溶血樣本：超速離心（12000×g，15分鐘）或脂質(zhì)吸附柱預(yù)處理

蛋白酶污染風(fēng)險：全程冰上操作，添加廣譜蛋白酶抑制劑

2.穩(wěn)定性驗(yàn)證

凍融實(shí)驗(yàn)：比較新鮮樣本與凍融后樣本OD值差異（CV需<10%）

長期保存：-80℃樣本每2個月檢測一次靶標(biāo)回收率（≥80%為合格）

3.數(shù)據(jù)校準(zhǔn)

高背景值處理：設(shè)置空白孔（僅加樣本稀釋液）扣除本底信號

濃度超限樣本：梯度稀釋后復(fù)測，選取OD值落在線性區(qū)間內(nèi)的稀釋度